Полезные статьи

Правила работы в иммунологической лаборатории

Правила работы в лаборатории

ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ К ПРОВЕДЕНИЮ

При выполнении лабораторных работ по биологии и микробиологии работают с различным биологическим материалом и культурами микроорганизмов. Изучают строение живых организмов и их основную структурную единицу – клетку. Клетки имеют небольшие размеры, поэтому невооруженным глазом их рассмотреть невозможно. Для их изучения готовят определенным образом препараты, которые рассматривают под микроскопом.

Микробиология изучает мельчайшие, невидимые невооруженным глазом существа – микробы. Они находятся повсюду: в почве, воздухе, воде, на сырье, различных материалах, оборудовании, продуктах питания и т. д. Одни из них безопасны для человека, другие могут вызывать различные заболевания.

Увидеть микроорганизмы, так же как и отдельные клетки, можно только под микроскопом, приготовив соответствующим образом препараты. Поэтому работы на уровне клеток и микроорганизмов проводят в особых лабораториях, которые должны отвечать определенным требованиям. На лабораторном столе должны находиться: спиртовка; штатив для пробирок

и бактериальных петель и игл; набор красителей; промывалка; кювета с шинами для окраски препаратов; фильтровальная бумага; карандаш для стекла; дезинфицирующий раствор.

В лаборатории должны быть созданы условия, обеспечивающие стерильность работы, при которых будет исключена возможность попадания как посторонних микроорганизмов извне, так и микроорганизмов из лаборатории в окружающую среду. Поэтому в микробиологической лаборатории необходимо строго соблюдать определенные правила работы и поведения, которые предотвращают возникновение заражения.

Правила работы в лаборатории

1. В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды – халата.

2. Не разрешается выходить в халате за пределы лаборатории и надевать на халат верхнюю одежду.

3. В помещении лаборатории запрещается принимать пищу и хранить продукты питания.

4. Не выносить за пределы лаборатории, какие бы то ни было посуду и материалы, которые используются для проведения лабораторных работ (пробирки, краски и т. д.).

5. Не класть на стол личные вещи (сумки, папки и др.), держать их на специально отведенных местах.

6. Если микроорганизмы попадают на оборудование или пол (разобьется пробирка или чашка Петри, на которой они росли), об этом надо сразу же сообщить преподавателю или

лаборанту, а на данном месте провести обеззараживание, залив его дезинфицирующим раствором. После этого необходимо провести уборку.

7. Во время выполнения практических работ нельзя открывать форточки. Необходимо соблюдать тишину, избегать лишнего движения и хождения, открывания и закрывания дверей – всего того, что усиливает движение воздуха.

8. Перед началом работы дежурные проводят влажную уборку помещения, а столы протирают дезинфицирующим раствором.

9. Каждый студент перед началом работы должен проверить, все ли необходимое находится на его столе и исправен ли микроскоп.

10. Раздача необходимого для проведения лабораторной работы материала и посуды проводится лаборантом или дежурными.

11. На занятиях студенты должны иметь тетрадь и карандаши (простой и цветные – красный и синий). Рисунки при микроскопировании надо делать с препаратов, а не из книг или

12. По окончании работы все используемые инструменты обеззараживают. Бактериальные петли и иглы прокаливают над пламенем спиртовки, а пипетки и стекла помещают в дезинфицирующий раствор.

13. Все используемые при работе микробные культуры сдают лаборанту, который проводит их обеззараживание или в автоклаве, или в дезинфицирующем растворе.

14. В конце занятий надо привести в порядок рабочий стол, протереть и убрать микроскоп, тщательно вымыть руки (при работе с заразным материалом их сначала дезинфицируют) и снять халат.

Уборка рабочего места

По окончании работы бе­рут пинцетом кусок ваты, смачивают его в 5% растворе хлор­амина или в 5% растворе формалина и протирают им поверхность стола на рабочем месте. Такого рода повседневная дезинфекция носит профи­лактический характер.

labx.narod.ru

Иммунологическая лаборатория

Иммунологическая лаборатория является структурным подразделением Клиники ЮУГМУ Минздрава России3.

Задачами иммунологической лаборатории являются: проведение лабораторных исследований на этапах: доврачебной, амбулаторно-поликлинической (в том числе первичной медико-санитарной помощи, медицинской помощи женщинам в период беременности, во время и после родов, специализированной медицинской помощи), стационарной (в том числе первичной медико-санитарной помощи, медицинской помощи женщинам в период беременности, во время и после родов, специализированной медицинской помощи), высокотехнологичной медицинской помощи. в объеме, согласно заявленной номенклатуре исследований при аккредитации КДЛ, в соответствии с лицензией ЛПУ (иммунологических методом ИФА, иммунохимии, турбодиметрии, проточной цитометрии, биохимических, коагулогических, молекулярно-генетических методом ПЦР.)

Основными направлениями деятельности иммунологической лаборатории являются:

  • комплексная оценка иммунного статуса, включая определение уровня Т-хелперов у больных с ВИЧ-инфекцией методом проточной цитофлуориметрии;
  • определение маркеров инфекционных заболеваний, включая TORCH-инфекции;
  • определение маркеров вирусных гепатитов;
  • диагностика состояния щитовидной железы;
  • определение уровня онкомаркеров;
  • диагностика аутоиммунных заболеваний;
  • комплексная оценка гемостаза;
  • определение липидного статуса пациентов;
  • диагностика заболеваний, передающихся половым путем, методом ПЦР;
  • определение вирусной нагрузки вирусов гепатитов методом ПЦР;
  • определение мутаций генов для диагностики изменений системы гемостаза и индивидуальной чувствительности к ряду лечебных препаратов.
  • Диагностические исследования осуществляют специалисты: врачи клинической лабораторной диагностики; биологи; фельдшера-лаборанты; медицинские лабораторные техники; лаборанты.

    Иммунологической лабораторией определены, документированы и подлежат выполнению нормативные документы, разработанные в соответствии с:

  • Национальным стандартом российской Федерации ГОСТ РИСО 15189-2006 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности»;
  • Приказом №380 «О состоянии и мерах по совершенствованию лабораторного обеспечения и диагностики»;
  • Приказом №45 от 7 февраля 2000г «О системе мер по повышению качества лабораторных исследований;
  • СП 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»;
  • СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и возбудителями паразитарных болезней»;
  • МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности»;
  • Санитарным предписанием ЦГСЭН в г.Челябинске от 28.12.01г. «Об организации и проведении лабораторных исследований в рамках производственного контроля.»;
  • СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами»;
  • Приказом МЗ РФ №83 от 16.08.2000г. Приложение №3 «Порядок проведения предварительных и периодических медицинских осмотров (обследований) работников, занятых на вредных работах;
  • Приказом МЗ РФ №229 от 27.06.2001г. «О Национальном календаре профилактических прививок по эпидемиологическим показаниям».

«Акты биологической безопасности»;«Инструкции по обеспечению санитарно противоэпидемического режима;«Перечень предметов оборудования»; «Протоколы технического обслуживания»; «Руководство по взятию, хранению и обращению с первичной пробой»; Стандартные операционные процедуры (СОП); «Журнал проведения внутрилабораторного контроля качества»; «Сертификат и результаты участия во внешнем контроле качества»; «Журнал приема и регистрации материала»; «Журнал рассмотрения претензий и контроля за постаналитическими процедурами».

clinica174.ru

Организация микробиологической и иммунологической лабораторий

Вся работа с микробами проводится в лабо­раториях, которые в зависимости от основных задач могут быть научно-исследовательскими, диагностическими или производственными.

Лаборатория — это учебное, научное или производственное учреждение или же под­разделение учреждения/предприятия, вы­полняющее экспериментальные, контроль­ные или аналитические исследования.

В системе органов здравоохранения имеются:

1. Клинико-диагностические лаборатории общего или специального (биохимическая, бактериологическая, иммунологическая, ци­тологическая и др.) типов, входящие в состав больниц, поликлиник, диспансеров и других лечебно-профилактических учреждений.

2. Бактериологические лаборатории Госса­нэпиднадзора.

3. Санитарно-бактериологические лабора­тории Госсанэпиднадзора.

4. Санитарно-химические лаборатории Гос­санэпиднадзора.

5. Центральные (ЦНИЛ), проблемные, от­раслевые, учебные лаборатории вузов.

6. Специализированные лаборатории (осо­бо опасных инфекций и др.).

Углубление знаний о природе микробов и разделение инфекций на бактериальные, вирусные, грибковые, протозойные, хлами-дийные, риккетсиозные и другие отражается и на специфике работы микробиологических лабораторий. В настоящее время лаборатории и более крупные лабораторные учреждения (отделы, институты, производственные пред­приятия), как правило, специализированы и работают с той или иной группой микробов.

Все работы с вирусами проводятся в ви­русологических лабораториях, оснащенных соответствующим оборудованием и исполь­зующих специальные методы исследования. Существуют микологические и протозоологи-ческие лаборатории. Специализированный ха­рактер приобретают и бактериологические ла­боратории, в которых работа концентрируется на определенных группах бактерий, например: риккетсиозные, туберкулезные, лептоспиро-зные, анаэробные и др. Иммунологические исследования проводятся в иммунологических лабораториях, хотя отдельные виды исследова­ний, например, серодиагностика инфекцион­ных болезней, могут выполняться и в микро­биологических лабораториях.

Лабораторная работа с патогенными мик­робами проводится в специально оборудован­ных лабораториях, обеспечивающих режим работы и технику безопасности, исключа­ющие возможность заражения персонала и утечку микробов за пределы лаборатории.

Необходимость четкой регламентации усло­вий работы с микробами, в различной степе­ни опасными для сотрудников лабораторий, населения и окружающей среды, обусловила разработку классификации микробов, в кото­рой последние подразделены на 4 группы по степени их биологической опасности (клас­сификация Всемирной организации здраво­охранения). В 1-ю группу включены микробы с низкой степенью опасности, т. е. микробы, которые в обычных условиях, как правило, не вызывают заболеваний людей и сельскохо­зяйственных животных. Во 2-ю группу вклю­чены микробы со средней степенью опас­ности, т. е. микробы, способные вызывать заболевания людей или сельскохозяйствен­ных животных, но в обычных условиях не представляющие опасности для работников лабораторий и для населения; лабораторные заражения и заболевания редко приводят к серьезным последствиям для заболевших, а наличие эффективных средств профилактики и лечения исключает возможность распро-

helpiks.org

Принципы организации и оборудования микробиологической лаборатории, правила работы в ней

Микробиологическая лаборатория в зависимости от ее профиля выполняет бактериологические, вирусологические и иммунологические исследования. В соответствии с назначением, лаборатория должна быть оснащена соответствующей аппаратурой и помещением. Лаборатория должна располагаться в отдельном здании или изолированной его части, оборудована водопроводом, канализацией, отоплением, горячим водоснабжением и иметь отдельный вход. Микробиологическая лаборатория общего назначения должна иметь следующие комнаты.

Бактериологическую с боксами

Подсобные помещения (душ, склад, гардероб, туалет)

Лабораторная комната должна быть светлой, просторной, стены окрашены масляной краской или облицованы керамической плиткой. В лабораторной комнате необходима холодная и горячая вода, раковина, дезинфицирующий раствор для мытья и обработки рук, аптечка для оказания первой медицинской помощи. В комнате должен находится холодильник, термостат, центрифуги, микроскопы, лабораторная мебель, рабочие столы, емкость для сбора инфицированной посуды и материала.

Бактериологическая комната с боксами. Для работы в стерильных условиях в бактериологической комнате должны быть оборудованы боксы с предбоксниками, с системой приточно-вытяжной вентиляции и бактерицидными лампами. В боксе должен находится стол с необходимыми принадлежностями для проведения стерильных посевов (горелка, стерильные пипетки, пробирки, чашки Петри и пробирки с питательной средой, бактериологическая петля и др.). Поверхность рабочего стола должна быть водонепроницаема, устойчива к дезинфектантам, кислотам, щелочам, органическим растворителям и умеренному нагреванию. Стены, потолок и пол комнаты должны быть моющимися, непроницаемыми для жидкости, устойчивы к дезинфицирующим растворам. В настоящее время используют для проведения стерильных работ ламинированные боксы, где оборудована подача стерильного воздуха под давлением.

Автоклавная используется для стерилизации посуды, питательных сред, одежды, а также для обеззараживания лабораторных отходов. Автоклавная должна быть оснащена следующим оборудованием: автоклавы, печи Пастера, стерилизаторы различной емкости, шкафы для стерильной посуды. К работе на автоклавах допускаются лица прошедшие специальную подготовку.

Виварий предназначен для проведения исследований на животных. Необходимо иметь два помещения вивария – одно для содержания чистых животных и второе для лабораторных животных, с которыми проводятся исследования. Вход в виварий должен быть ограничен специально отобранным персоналом. Клетки, кормушки для животных должны быть изготовлены из материала устойчивого к дезинфицирующим растворам.

Моечная комната предназначена для мойки лабораторной посуды и должна быть оборудована холодным и горячим водоснабжением, раковиной, а также шкафами для хранения и складирования пипеток, колб, чашек Петри и другой посуды.

Средоварочная комната располагается рядом с моечной и стерилизационной комнатами и предназначена для приготовления и разлива питательных сред. Комната оборудуется газовой или электрической плитой, раковиной с подведенной холодной и горячей водой. В ней необходимо иметь дистиллятор, холодильник для хранения питательных сред и биологических компонентов, бокс для приготовления и разлива питательных сред и растворов в стерильных условиях, шкафы для хранения сухих питательных сред, лабораторной посуды и химических реактивов.

Правила работы и поведения

в бактериологической лаборатории общего назначения

В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды – халата, шапочки, сменной обуви.

Запрещается в помещении прием и хранение пищи. Курение.

Нельзя использовать лабораторную спец. одежду за пределами лаборатории.

Зараженный материал подлежит уничтожению, инструменты и поверхность рабочего стола, дезинфицируют после окончания работ.

После работы с культурой, животными, перед уходом из лаборатории необходимо вымыть руки.

Штаммы микроорганизмов, заразный материал должны хранится в сейфе или холодильнике закрытыми и опечатанными.

Необходимо проводить обеззараживания предметов, одежды, стола, комнаты, в случае если разбился сосуд с инфицированным материалом или произошел неосторожный разлив заразного материала.

Сотрудники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных заболеваний, с возбудителями которых возможна работа в лаборатории.

В лаборатории должна быть инструкция по технике безопасности, которую персонал должен знать и строго выполнять. Необходимо обязательно немедленно сообщить руководителю лаборатории обо всех аварийных ситуациях, создающих угрозу биологической безопасности и проводить все мероприятия для предотвращения последствий.

Каждая бактериологическая лаборатория должна иметь лицензию на право работы с возбудителями.

№5 Техника приготовления бактериального мазка и простые методы его окраски.

studfiles.net

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРИИ И ИХ ОБОРУДОВАНИЕ

Введение

Все микробиологические, биохимические и моле-кулярно-биологические исследования микроорганизмов про­водят в специальных лабораториях, структура и оборудование которых зависят от объектов исследования (бактерий, вирусов, грибов, простейших), а также от их целевой направленности (научные исследования, диагностика заболеваний). Изучение иммунного ответа и серодиагностика заболеваний человека и животных осуществляют в иммунологических и серологичес­ких (serum — сыворотка крови) лабораториях.

Бактериологические, вирусологические, микологические и серологические (иммунологические) лаборатории входят в со­став санитарно-эпидемиологических станций (СЭС), диагнос­тических центров и крупных больниц. В лабораториях СЭС выполняют бактериологические, вирусологические и серологи­ческие анализы материалов, полученных от больных и контак­тировавших с ними лиц, обследуют бактерионосителей и про­водят санитарно-микробиологические исследования воды, воз­духа, почвы, пищевых продуктов и т.д.

В бактериологических и серологических лабораториях боль­ниц и диагностических центров проводят исследования с целью диагностики кишечных, гнойных, респираторных и дру­гих инфекционных заболеваний, осуществляют микробиологи­ческий контроль за стерилизацией и дезинфекцией.

Диагностику особо опасных инфекций (чума, туляремия, сибирская язва и др.) проводят в специальных режимных ла­бораториях, организация и порядок деятельности которых строго регламентированы.

В вирусологических лабораториях диагностируют заболева­ния, вызванные вирусами (грипп, гепатит, полиомиелит и др.), некоторыми бактериями — хламидиями (орнитоз и др.) и риккетсиями (сыпной тиф, Ку-лихорадка и др.). При организации и оборудовании вирусологических лабораторий учитывают спе­цифику работы с вирусами, культурами клеток и куриными эмбрионами, требующую строжайшей асептики.

В микологических лабораториях проводят диагностику за­болеваний, вызываемых патогенными грибами, возбудителями микозов.

Лаборатории обычно размещаются в нескольких помещени­ях, площадь которых определяется объемом работ и целевым назначением.

В каждой лаборатории предусмотрены:

а) боксы для работы с отдельными группами возбудителей;

б) помещения для серологических исследований;

в) помещения для мойки и стерилизации посуды, приготов­
ления питательных сред;

г) виварий с боксами для здоровых и подопытных живот­
ных;

д) регистратура для приема и выдачи анализов.

Наряду с этими помещениями в вирусологических лабора­ториях имеются боксы для специальной обработки исследуе­мого материала и работы с культурами клеток.

Оборудование микробиологических лабораторий

Лаборатории снабжены рядом обязательных приборов и аппаратов.

1. Приборы для микроскопии: биологический иммерсион­ный микроскоп с дополнительными приспособлениями (ос­ветитель, фазово-контрастное устройство, темнопольный кон­денсор и др.), люминесцентный микроскоп.

2. Термостаты и холодильники.

3. Приборы для приготовления питательных сред, растворов и т.д.: аппарат для получения дистиллированной воды (дистил­лятор), технические и аналитические весы, рН-метры, аппара­тура для фильтрования, водяные бани, центрифуги.

4. Набор инструментов для манипуляций с микробами: бак­териологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.

5. Лабораторная посуда: пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки и др., аппарат для изготовления ватно-марлевых про­бок.

Крупные диагностические комплексы имеют автоматичес­кие анализаторы и компьютеризированную систему оценки полученной информации.

В лаборатории выделено место для окраски микроскопичес­ких препаратов, где находятся растворы специальных красите­лей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой и емкостью с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми пита­тельными средами, химическими реактивами, диагностически­ми препаратами и другими материалами.

В крупных лабораториях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки се­рологических реакций. Для выращивания, хранения культур, стерилизации лабораторной посуды и других целей используют следующую аппаратуру.

1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоян­ная температура. Оптимальная температура для размножения большинства патогенных микроорганизмов 37 «С. Термостаты бывают воздушными и водяными.

2. Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорга­низмов в анаэробных условиях.

3. С02 -инкубатор. Аппарат для создания постоянной тем­пературы и атмосферы определенного газового состава. Пред­назначен для культивирования микроорганизмов, требователь­ных к газовому составу атмосферы.

4. Холодильники. Используют в микробиологических лабора­ториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток и прочих биологически актив­ных препаратов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов при температуре ниже О °С применяют низкотем­пературные холодильники, в которых поддерживается темпе­ратура —20 °С или —75 «С.

5. Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганиз­мов, эритроцитов и других клеток, для разделения неоднород­ных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях исполь­зуют центрифуги с различными режимами работы.

6. Сушилъно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Пред­назначен для суховоздушной стерилизации стеклянной лабо­раторной посуды и других жаростойких материалов.

7. Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для сте­рилизации перегретым водяным паром (под давлением). В ми­кробиологических лабораториях используют автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, пере­носные).

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ, ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ, МИКОЛОГИЧЕСКИЕ, ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРИИ И ИХ ОБОРУДОВАНИЕ. УСТРОЙСТВО СОВРЕМЕННЫХ МИКРОСКОПОВ. МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МОРФОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ

1. Правила работы и организация микробиологических (бактериологических, вирусологических, микологи­ческих) лабораторий.

2. Основные приборы и оборудование микробиологичес­кой лаборатории.

3. Микроскопы и микроскопическая техника. Правила работы с иммерсионным микроскопом (объективами).

Демонстрация

1. Устройство и применение основных приборов и обо­рудования, используемого в микробиологических ла­бораториях: термостата, центрифуг, автоклава, су­шильного шкафа, инструментария и посуды.

2. Устройство биологического микроскопа. Различные ме­тоды микроскопии: темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная.

3. Препараты микробов (дрожжей и бактерий) при раз­личных методах микроскопии.

1. Микроскопировать и зарисовать препараты дрожже-подобных грибов рода Candida, используя различные виды микроскопии.

Методические указания

Правила работы в микробиологических лабораториях.

Работу в микробиологической лаборатории медицинского учреждения проводят с возбудителями инфекционных заболеваний — пато­генными микроорганизмами.

Поэтому для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутрен­него распорядка:

1. Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых слу­чаях работающие надевают на лицо маску из марли. Ра­бота с особо опасными микробами регламентируется спе­циальной инструкцией и проводится в режимных лабора­ториях.

2. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.

4. При случайном попадании инфицированного мате­риала на стол, пол и другие поверхности это место необ­ходимо тщательно обработать дезинфицирующим раство­ром.

5. Хранение, наблюдение за культурами микробов и их уничтожение должны производиться согласно специаль­ной инструкции. Культуры патогенных микробов реги­стрируют в специальном журнале.

6. По окончании работы руки следует тщательно вы­мыть, а при необходимости обработать дезинфицирующим раствором.

Микроскопы и методы микроскопии

Рис. 1.1. Микроскопы.

а — общий вид микроскопа «Биолам»; б — микроскоп МБР-1: 1 — основание микроскопа; 2 — предметный столик; 3 — винты для перемещения предмет­ного столика; 4 — клеммы, прижимающие препарат; 5 — конденсор; 6 — кронштейн конденсора; 7 — винт, укрепляющий конденсор в гильзе; 8 — рукоятка перемещения конденсора; 9 — рукоятка ирисовой диафрагмы кон­денсора; 10 — зеркало; 11 — тубусодержатель; 12 — рукоятка макрометричес-кого винта; 13 — рукоятка микрометрического винта; 14 — револьвер объек­тивов; 15 — объективы; 16 — наклонный тубус; 17 — винт для крепления ту­буса; 18 — окуляр.

Для микробиологических исследований используют не­сколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, электронный) и специальные методы микроскопии (фа-зово-контрастный, темнопольный).

В микробиологической практике применяют микроскопы отечественных марок: МБР-1, МБИ-2, МБИ-3, МБИ-6, «Био­лам» Р-1 и др. (рис. 1.1). Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков различных микробов, величина которых не менее 0,2—0,3 мкм.

Иммерсионная микроскопия

Применяется для увеличения разрешающей способности метода световой микроскопии. Раз­решающая способность системы светооптической микроско­пии определяется длиной волны видимого света и числовой апертурой системы. Числовая апертура показывает величину угла максимального конуса света, попадающего в объектив, и зависит от оптических свойств (преломляющей способности) среды между объектом и линзой объектива. Погружение объ­ектива в среду (минеральное масло, вода), имеющую высокий коэффициент преломления, близкий к таковому стекла, пре­пятствует рассеянию света от объекта.

Рис. 1.2. Ход лучей в иммерсионной системе, п — показатель преломления.

Рис. 1.3. Ход лучей в темнопольных конденсорах, а — параболоид-конденсор; б — кардиоид-конденсор; 1 — объектив; 2 — иммерсионное масло; 3 — препарат; 4 — зеркальная поверхность; 5 — диа­фрагма.

Таким образом достигается увеличение числовой апертуры и соответственно разре­шающей способности. Для иммерсионной микроскопии при­меняют специальные иммерсионные объективы, снабженные меткой (МИ — масляная иммерсия, ВИ — водная иммерсия). Предельная разрешающая способность иммерсионного микро­скопа не превышает 0,2 мкм. Ход лучей в иммерсионной системе показан на рис. 1.2.

Общее увеличение микроскопа определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, уве­личение микроскопа с иммерсионным объективом 90 и окуля­ром 10 составляет: 90 x 10 = 900.

Микроскопия в проходящем свете (светлопольная микроско­пия) используется для изучения окрашенных объектов в фик­сированных препаратах.

Темнопольная микроскопия. Применяется для прижизненно­го изучения микробов в нативных неокрашенных препаратах. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц, взвешенных в жидкости (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоид-конденсора, которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе (рис. 1.3). При этом способе освещения в объектив попадают только лучи, отраженные от поверхности объекта. В результате на темном фоне (неосвещенном поле зрения) видны ярко светя­щиеся частицы. Препарат в этом случае имеет вид, показанный на рис. 1.4, б (на вклейке).

Фазово-контрастная микроскопия. Предназначена для изуче­ния нативных препаратов. Фазово-контрастное приспособле­ние дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объек­ты. Свет проходит через различные биологические структуры с разной скоростью, которая зависит от оптической плотности объекта. В результате возникает изменение фазы световой волны, не воспринимаемое глазом. Фазовое устройство, вклю­чающее особые конденсор и объектив, обеспечивает преобра­зование изменений фазы световой волны в видимые изменения амплитуды. Таким образом достигается усиление различия в оптической плотности объектов. Они приобретают высокую контрастность, которая может быть позитивной или негатив­ной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изо­бражение объекта в светлом поле зрения, негативным — свет­лое изображение объекта на темном фоне (см. рис. 1.4; на вклейке).

Для фазово-контрастной микроскопии используют обыч­ный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устрой­ство КФ-1 или КФ-4 (рис. 1.5), а также специальные освети­тели.

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно­вана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее под воздействием внешнего излучения: светового, ультрафиолето­вого, ионизирующего и др. Фотолюминесценция — люмине­сценция объекта под влиянием света. Если освещать люминес-цирующий объект синим светом, то он испускает лучи крас­ного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В результате возникает цветное изображение объекта.

Рис. 1.5. Фазово-контрастное устройство, а — фазовые объективы; б — вспомогательный микроскоп; в — фазовый кон­денсор.

Длина волны излучаемого света (цвет люминесценции) зависит от физико-хими­ческой структуры люминесцирующего вещества.

Первичная люминесценция биологических объектов (собст­венная, или биолюминесценция) наблюдается без предвари­тельного окрашивания за счет наличия собственных люминес-цирующих веществ, вторичная (наведенная) — возникает в ре­зультате окрашивания препаратов специальными люминесци-рующими красителями — флюорохромами (акридиновый оран­жевый, ауромин, корифосфин и др.). Люминесцентная микро­скопия по сравнению с обычными методами обладает рядом преимуществ: возможностью исследовать живые микробы и обнаруживать их в исследуемом материале в небольших кон­центрациях вследствие высокой степени контрастности.

В лабораторной практике люминесцентную микроскопию широко применяют для выявления и изучения многих микро­бов.

Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способнос­ти светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяют для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других суб­микроскопических объектов. Световые лучи в таких микроско­пах заменяет поток электронов, имеющий при определенных ускорениях длину волны около 0,005 нм, т.е. почти в 100 000 раз меньше длины волны видимого света. Высокая разре­шающая способность электронного микроскопа, достигаю­щая 0,1-0,2 нм, позволяет получить общее полезное увеличе­ние до 1 000 000.

Наряду с приборами «просвечивающего» типа используют сканирующие электронные микроскопы, обеспечивающие рель­ефное изображение поверхности объекта. Разрешающая спо­собность этих приборов значительно ниже, чем у электронных микроскопов «просвечивающего» типа.

Правила работы с микроскопом

Работа с любым световым микроскопом включает установку правильного освещения по­ля зрения и препарата и его микроскопию различными объек­тивами. Освещение может быть естественным (дневным) или искусственным, для чего используют специальные источники света — осветители разных марок.

При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго придерживаться определенного порядка:

1) на приготовленный на предметном стекле и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;

2) повернуть револьвер до отметки иммерсионного объек­тива 90х или 10Ох;

3) осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;

4) установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;

5) провести окончательную фокусировку препарата микро­ метрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с пре­
паратом, так как это может повлечь поломку покровного стек­ла или фронтальной линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1—1 мм).

По окончании работы микроскопа необходимо удалить мас­ло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив 8х.

Для темнопольной и фазово-контрастной микроскопии ис­пользуют нативные препараты («раздавленная» капля и др., см. тему 2.1); микроскопируют с объективом 40х или специальным иммерсионным объективом с ирис-диафрагмой, позволяющей регулировать численную апертуру от 1,25 до 0,85. Толщина предметных стекол не должна превышать 1 — 1,5 мм, покров­ных — 0,15—0,2 мм.

studopedia.ru